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說了這么多的RNA提取試劑以下幾點你肯定不知道

  • 發(fā)布日期:2022-01-16      瀏覽次數(shù):1825
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        RNA提取試劑提供了一種快速,簡單,經(jīng)濟(jì)有效的方法,可從全血,哺乳動物細(xì)胞,細(xì)菌細(xì)胞和真菌細(xì)胞中分離總RNA。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時使污染物通過柱被有效地洗去。純的RNA用RE緩沖液洗脫,不用酚提取或醇沉淀。
        RNA提取試劑主要物質(zhì)是異硫氰酸胍,它可以破壞細(xì)胞使rna釋放出來的同時,保護(hù)rna的完整性。加入氯仿后離心,樣品分成水樣層和有機層。rna存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后,rna可以通過異丙醇沉淀來還原。
        無論是人、動物、植物還是細(xì)菌組織,trizol法對少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>;107)均有較好的分離效果。RNA提取試劑TrizolReagent操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。trizol抽提的總rna能夠避免dna和蛋白的污染。故而能夠作rna印跡分析、斑點雜交、poly(a)+選擇、體外翻譯、rna酶保護(hù)分析和分子克隆。提取時需要注意一些問題:提取時要做到超凈臺內(nèi)操作、操作帶一次性手套、ep管及tip頭都要用0.1%處理(0.1%depc浸泡過夜后,高壓蒸氣滅菌)、小心、細(xì)致、晃動及每次移液要輕。這樣做的*目的就是兩個,一是小心rnase的污染降解rna;二是動作過度暴力破壞rna的完整性。
        另外你提的rna做電泳的問題,一般rna電泳應(yīng)該是做甲醛變性電泳,但是一般的瓊脂糖電泳也可以,需要上樣量稍微大些,并且跑電泳的時間越短越好。
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